公猪精液质量的评定

　　猪精液采集后，首先要评定公猪精液质量，然后才能对精液进行进一步处理，以获取高质量的精液。处理精液以前，选择能有效筛选精液的方法对提高猪场的繁殖性能是必要的。在最理想的情况下，在精液处理前对公猪的精液进行全面地评估，以鉴别出那些劣质精液。对储藏的精液，每天必须检查总活动精子数和评估精子的外形；这样，将可以确保用于人工授精的精液不被污染。因此，这篇文章的目的就是叙述公猪精液质量的评定方法和说明哪些公猪的精液可以进入试验室进行进一步处理。
　　密度
　　一般在评定公猪精液的质量时应检测四个基本参数：精子密度、活力、外形和顶体完整性。其中，精子的密度和活力这两个基本参数常在精液处理前筛选精液。原因是测定这两个参数花费的时间最少，而且可以用它们来计算精液的稀释倍数。
　　测定精液的浓度或精子的总数不仅是评定精液质量的组成部分，更重要的是用来监控公猪健康状况和繁殖潜力；并且，它还是优化个体遗传潜力的主要考虑因素。正确的评定精液的质量不只是增加公猪每次射精量和提高公猪舍的使用效率的唯一因素。精液质量评定的目的是保证有足够数量有活力的精子用于人工授精。
　　精子的活力
　　精液的活力是精液评定的一个重要方面。最近的一个研究表明：当在采精后立即(少于24h)进行评定和输精时，使用精子活力低于62.5%，产仔数/产仔率将下降。然而，由于商用种公猪的精液很少会在这么短时间内使用，所以，一般精液都经过处理后才输送到母猪场使用。精液经过储存后，它的活力会下降。所以在评定种公猪精液时，活力最小值应大于60%。许多种公猪站制定了精子活力在70~80%之间的筛选标准。精液经过实验室处理后活力最小值应根据使用前计划储存时间和在这段储存时间内的预期活力下降而定。并且，种公猪站必须考虑养猪场精液储存条件和处理精液的能力比公猪站差这一点。考虑公猪站与母猪场之间精液输送的差异将有助于公猪站选择初活力的接受水平以确保输送精液的精子活力在60.0%以上。
　　通过显微镜从视觉上估计精子活力的方法应用最广泛。技能和经验对结果准确性有一定的影响。简而言之，在温热的载玻片上放置一小滴精液稀释液(所有的评估中精液的稀释率必须统一标准)，然后盖上盖玻片。样本稀释到用400倍的物镜足以观察全部精子细胞，总体的估计来自观察的精子群。这样，应首先对实验员进行培训。这种培训首先要求实验员对总体精子活力进行估计，然后实验员用显微镜计算在5个区域内10个单元格的精子总数和有活力的精子占总精子的百分数，以验证精子总活力。
　　外形
　　精子的外形和顶体完整同样对精子的生存力有影响。就估计精液质量而言，评定精子外形比评定精子活力更能体现精液质量。这两个参数和精子活力在精液质量评定时都至关重要。它们一起决定精液的取、舍。
　　运动的精子可能外形上不正常；但是，运动力低的精子可能受精。然而，没有顶体的精子不可能受精。用这三个参数标准评定精液质量就很可能低估了精液真正的受精能力和公猪精液质量。
　　正如精子的活力，精子的外形评定表明：在使用人工授精时，需要一个确定正常精子外形百分数提高母猪繁殖率。研究资料还表明：精子常规评定使用的是外形这个参数。如果是使用精液，那么正常形态精子百分数小于70%的精液应认为是劣质精液。由于正常形态精子百分数在储存期将减少，而且由于在公猪个体间差异较大。所以，当使用长期储存(>24h)的精液时；最初处理的精液的正常形态的精子百分数要达在70%以上。
　　在检查精子活力同时可以粗略地对精子外形进行评定。然而，理想的外形检测要使用显微镜，它能区分精子的各个部分。精确地评定精子的外形是通过分别计算正常精子头部、微滴和尾部数。吸取1-2滴精液按1：10与稀释剂混合，使用显微镜(400倍或1000倍)观察，外形百分数可以直接计算出来。如果精液不可能立即被检测(<30分钟)，应先用0.5-1毫升生理盐水固定或保存在载玻片上。除了保存样品，精子同时被固定。因此，更容易观察。可以观察湿的样本或者制成干的固定的标本再进行观察。头部、尾部和胞质畸形的精子计为不正常的精子。尽管有近端小滴(靠近头部)的精子对精液质量评定的影响较小。然而，当近端小滴迅速增加时，用产仔率和产仔数来衡量的繁殖力将逐渐降低。在采集的精液中末端微滴比近端小滴更易被发现，末端小滴的影响似乎与近端小滴一样。尽管一些资料认为公猪精液细胞质微滴的影响是有限的。
　　顶体完整性
　　顶体膜覆盖精子头部的三分之二，它含有穿透卵母细胞所必需的酶。顶体完整性的评定很费时,需要比较先进的显微镜，并且要有熟练地操作技能。一些研究表明：顶体完整性比精子的活力在评定精子质量方面更具有代表性。顶体完整性检查与精子外形检查的方法一样。然而，在检测单个精子细胞时应该先把载玻片放在显微镜下，然后观察精子顶体层的差别。顶体完整率小于51%的精液认定为劣质的精液，即使精液的受精率可能是处于同一水平。顶体的完整性评定使用与活力和形态学评定一样的原理。当精液被长期保存时，正常顶体百分数小于51%精液的受胎率可能很低。活力，外形，或顶体完整性的评定乎并不能完全估计繁殖力，但是它却是精子生存能力的基本表现。与公猪的射精能力预测产仔数和受胎率相比，以上所述的估计方法是通过消灭劣质的精液来影响受胎率和产仔数。
　　在外观评定中使用染色剂
　　粗略地外观评定单个公猪精液是必需的；然而，定期详细地检测可能提供了一种有效质量监控方法，以确保精液粗略地评定是否与精液真实外观质量相符。详细地外观评定要使用显微镜，有时需要使用染色剂对精子细胞进行染色。与总外形检测相比，它在高倍镜头(1000x：油浸)下对单个精子细胞进行检测。详细地外形检测时，头部、中部和尾部应分开计算。首先曙红染色剂(商用外形染色剂)与精液按1：1混合制成载玻片涂片。这样就能充分区分精子头部形态的微小差别。通常是计算100个总精子细胞，然后计算出正常精子细胞所占百分数，其它在外观检查使用的染色剂有：精子头部染色威廉士染色剂、顶体染色的萘酚黄和红霉素染色剂。
　　外观，颜色和气味
　　尽管显微镜评定是取、舍公猪精液的标准；但是，明显的视觉和嗅觉特性是精液品质的象征。正常公猪精液必须具有可观的体积(>150毫升)，并且是乳白色的就像脱脂乳。精液中偶而带少量的血，这些血通常是来自尿道，使精液略带黄色。
　　采集到的精液决不能有明显的异味,如果有，很可能是精液采集过程中卫生环境差；也可能是精液采集过程存在不规则地波尔人卫生流程。散发的气味很可能就是包皮分泌液的反映(尿)，包皮分泌液通常满载大量的细菌和外来的污染物。在精液稀释液中使用抗生素可以在精液贮存期间控制病原体的生长，并不能大大地减少和防止采精时的细菌污染。所以，必须检查精液有无异味，并且一旦发现精液有异味就应废弃。此外、在大多数的公猪场应有例行的周期性输精培训。细菌能够在较差的环境条件下大量繁殖，并且能在实验室进行检测。虽然用于输精的精液几乎不可避免会带有细菌；但是，还极少有关于细菌形状、含量与繁殖力之间关系的报道。然而，由于细菌污染与精液的保存时间减少、精液凝集以及子宫传染性有关。所以，应定期地检验精液中的细菌污染，鉴定污染源以减少精液的污染。表2.列举在公猪精液中发现一些较常见的细菌以及可能的起源。
　　温度刺激和凝集
　　精液在收集后并不是直接输送到实验室(即在畜舍和实验室或储存库之间输送)，考虑温度波动对精子的影响这一点是非常重要的。快速地降温会导致精子的冷休克。当在显微镜下观察，这种现象很明显；有些精子尾部缠绕着头部卷曲或紧紧地盘旋在精子头部之下。通过显微镜观察，一般的精子可以正常地存在于精液中；然而，当温度小于32℃时超过10%尾部卷曲的精子明显显示出冷休克现象。但是，我们不应丢弃这些精液，应该考虑用稀释剂直接的稀释(原因是在同样的温度以防止更进一步损害)。
　　很多资料表明精液凝集对繁殖力有一定的影响。原因是凝块中的精子细胞是不能动的。也许是由于精子细胞在穿过睾丸时已损害或者伴随射精而损伤。精液凝集的其它原因可能包括在运输时温度变化范围过大和细菌污染。
　　当计算精子密度时，考虑实际凝集度相当重要，即使极少有精液凝块影响繁殖力的报道。然而，当用分光光度计检测稀释精液或用血球计计算精子时，可能会低估有活力的精子数。在显微镜下观察，有时可以看见精子在凝块内部运动；然而，没有充分的证据证明这些精子细胞在受精后会分开。所以，不管凝块外观上的运动性如何，都应根据出现精液凝块的百分数以校准计算整个精子数。精液中的凝块可能与公猪、公猪与精液稀释剂相互作用以及精液管理有关。
　　小结
　　精液质量参数的正常值和最小值。最重要的是记住那些难以精确地检测的外形上的和难以接近绝对值度量的顶体参数值。精子倾向性和样本标本滑动可能会明显地影响精子的计数。比如，只有当精子平放在显微镜载玻片上时，顶体才能被看见。我们提供一种与其它的评估公猪精液潜在的授精能力同样好的方法。符合公猪精液品质评定中的一个或一个以上质量参数的精液不能完全地确保的是优质的精液。由于在母猪场输送劣质精液引起繁殖性能降低最终归结来源的精液。